ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ
2019-nCoV-യ്ക്കുള്ള ലൈഫ്കോസം SARS-Cov-2-RT-PCR ഡിറ്റക്ഷൻ കിറ്റ്
പ്രതീക്ഷിക്കുന്ന ഉപയോഗം
തൊണ്ടയിലെ സ്വാബുകൾ, നാസോഫറിൻജിയൽ സ്വാബുകൾ, ബ്രോങ്കോഅൽവിയോളാർ ലാവേജ് ദ്രാവകം, കഫം എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് പുതിയ കൊറോണ വൈറസ് (2019-nCoV) ഗുണപരമായി കണ്ടെത്തുന്നതിനായി ഈ കിറ്റ് ഉപയോഗിക്കുന്നു. ഈ ഉൽപ്പന്നത്തിന്റെ കണ്ടെത്തൽ ഫലം ക്ലിനിക്കൽ റഫറൻസിനായി മാത്രമാണ്, കൂടാതെ ക്ലിനിക്കൽ രോഗനിർണയത്തിനും ചികിത്സയ്ക്കുമുള്ള ഏക തെളിവായി ഇത് ഉപയോഗിക്കരുത്. രോഗിയുടെ ക്ലിനിക്കൽ പ്രകടനങ്ങളും മറ്റ് ലബോറട്ടറി പരിശോധനകളും സംയോജിപ്പിച്ച് അവസ്ഥയുടെ സമഗ്രമായ വിശകലനം ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
പരിശോധന തത്വം
ഈ കിറ്റ് ഒരു-ഘട്ട RT-PCR സാങ്കേതികവിദ്യയെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ്. വാസ്തവത്തിൽ, 2019 ലെ പുതിയ കൊറോണ വൈറസ് (2019-nCoV) ORF1ab, N ജീനുകൾ എന്നിവ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ലക്ഷ്യ മേഖലകളായി തിരഞ്ഞെടുത്തു. സാമ്പിളുകളിൽ 2019 ലെ പുതിയ തരം കൊറോണ വൈറസ് RNA കണ്ടെത്തുന്നതിനായി നിർദ്ദിഷ്ട പ്രൈമറുകളും ഫ്ലൂറസെന്റ് പ്രോബുകളും (N ജീൻ പ്രോബുകൾ FAM ഉപയോഗിച്ചും ORF1ab പ്രോബുകൾ HEX ഉപയോഗിച്ചും ലേബൽ ചെയ്തിരിക്കുന്നു) രൂപകൽപ്പന ചെയ്തിരിക്കുന്നു. സാമ്പിൾ ശേഖരണം, RNA, PCR ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ എന്നിവയുടെ പ്രക്രിയ നിരീക്ഷിക്കുന്നതിനും അതുവഴി തെറ്റായ നെഗറ്റീവ് ഫലങ്ങൾ കുറയ്ക്കുന്നതിനുമായി ഒരു എൻഡോജെനസ് ഇന്റേണൽ കൺട്രോൾ ഡിറ്റക്ഷൻ സിസ്റ്റവും (CY5 ഉപയോഗിച്ച് ലേബൽ ചെയ്ത ഇന്റേണൽ കൺട്രോൾ ജീൻ പ്രോബ്) കിറ്റിൽ ഉൾപ്പെടുന്നു.
പ്രധാന ഘടകങ്ങൾ
| ഘടകങ്ങൾ | വോളിയം(**)48T/കിറ്റ്) |
| ആർടി-പിസിആർ പ്രതികരണ പരിഹാരം | 96µലി |
| nCOV പ്രൈമർ TaqMan പ്രോബ്മിക്സ്ചർ (ORF1ab, N ജീൻ, RnaseP ജീൻ) | 864µലി |
| നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണം | 1500µലി |
| nCOV പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ (l ORF1ab N ജീൻ) | 1500µലി |
സ്വന്തം റിയാജന്റുകൾ: ആർ‌എൻ‌എ വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ അല്ലെങ്കിൽ ശുദ്ധീകരണ റിയാജന്റുകൾ. നെഗറ്റീവ്/പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണം: ലക്ഷ്യ ശകലം അടങ്ങിയ ആർ‌എൻ‌എയാണ് പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണം, അതേസമയം നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണം ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് രഹിത വെള്ളമാണ്. ഉപയോഗ സമയത്ത്, അവ വേർതിരിച്ചെടുക്കലിൽ പങ്കെടുക്കുകയും പകർച്ചവ്യാധിയായി കണക്കാക്കുകയും വേണം. പ്രസക്തമായ ചട്ടങ്ങൾക്കനുസൃതമായി അവ കൈകാര്യം ചെയ്യുകയും നശിപ്പിക്കുകയും വേണം.
ആന്തരിക റഫറൻസ് ജീൻ മനുഷ്യന്റെ RnaseP ജീൻ ആണ്.
സംഭരണ \u200b\u200bഅവസ്ഥകളും കാലഹരണ തീയതിയും
-20±5℃, 5 തവണയിൽ കൂടുതൽ തവണ മരവിപ്പിക്കുന്നതും ഉരുകുന്നതും ഒഴിവാക്കുക, 6 മാസത്തേക്ക് സാധുതയുണ്ട്.
ബാധകമായ ഉപകരണം
FAM / HEX / CY5 ഉം മറ്റ് മൾട്ടി-ചാനൽ ഫ്ലൂറസെന്റ് PCR ഉപകരണവും ഉപയോഗിച്ച്.
മാതൃക ആവശ്യകതകൾ
1. ബാധകമായ മാതൃക തരങ്ങൾ: തൊണ്ടയിലെ സ്വാബുകൾ, നാസോഫറിൻജിയൽ സ്വാബുകൾ, ബ്രോങ്കോൽവിയോളാർ ലാവേജ് ദ്രാവകം, കഫം.
2. മാതൃക ശേഖരണം (അസെപ്റ്റിക് ടെക്നിക്)
തൊണ്ടയിലെ സ്വാബ്: ഒരേ സമയം രണ്ട് സ്വാബുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ടോൺസിലുകളും പിൻഭാഗത്തെ തൊണ്ടയിലെ ഭിത്തിയും തുടയ്ക്കുക, തുടർന്ന് സാമ്പിൾ ലായനി അടങ്ങിയ ഒരു ടെസ്റ്റ് ട്യൂബിൽ സ്വാബ് ഹെഡ് മുക്കുക.
കഫം: രോഗിക്ക് ആഴത്തിലുള്ള ചുമ ഉണ്ടായതിനുശേഷം, ചുമയ്ക്കുന്ന കഫം സാമ്പിൾ ലായനി അടങ്ങിയ ഒരു സ്ക്രൂ ക്യാപ് ടെസ്റ്റ് ട്യൂബിൽ ശേഖരിക്കുക; ബ്രോങ്കോഅൽവിയോളാർ ലാവേജ് ദ്രാവകം: മെഡിക്കൽ പ്രൊഫഷണലുകൾ സാമ്പിൾ എടുക്കൽ. 3. സാമ്പിളുകളുടെ സംഭരണവും ഗതാഗതവും.
വൈറസ് ഐസൊലേഷനും ആർ‌എൻ‌എ പരിശോധനയ്ക്കുമുള്ള സാമ്പിളുകൾ എത്രയും വേഗം പരിശോധിക്കണം. 24 മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ കണ്ടെത്താൻ കഴിയുന്ന സാമ്പിളുകൾ 4 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ സൂക്ഷിക്കാം; 24 മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ കണ്ടെത്താൻ കഴിയാത്തവ.
മണിക്കൂറുകൾ -70 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിലോ അതിൽ താഴെയോ സൂക്ഷിക്കണം (-70 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ് സംഭരണ സാഹചര്യമില്ലെങ്കിൽ, അവ
താൽക്കാലികമായി -20℃ റഫ്രിജറേറ്ററിൽ സൂക്ഷിക്കുന്നു). ഗതാഗത സമയത്ത് സാമ്പിളുകൾ ആവർത്തിച്ച് മരവിപ്പിക്കുന്നതും ഉരുകുന്നതും ഒഴിവാക്കണം. ശേഖരിച്ച ശേഷം എത്രയും വേഗം സാമ്പിളുകൾ ലബോറട്ടറിയിലേക്ക് അയയ്ക്കണം. സാമ്പിളുകൾ ദീർഘദൂരത്തേക്ക് കൊണ്ടുപോകേണ്ടതുണ്ടെങ്കിൽ, ഡ്രൈ ഐസ് സംഭരണം ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
പരീക്ഷണ രീതികൾ
1 സാമ്പിൾ പ്രോസസ്സിംഗും ആർ‌എൻ‌എ വേർതിരിച്ചെടുക്കലും (സാമ്പിൾ പ്രോസസ്സിംഗ് ഏരിയ)
ആർ‌എൻ‌എ വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നതിനായി 200μl ദ്രാവക സാമ്പിൾ എടുക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു. അനുബന്ധ വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ ഘട്ടങ്ങൾക്ക്, വാണിജ്യ ആർ‌എൻ‌എ വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ കിറ്റുകളുടെ നിർദ്ദേശങ്ങൾ കാണുക. നെഗറ്റീവ്, നെഗറ്റീവ് എന്നിവ രണ്ടും
ഈ കിറ്റിലെ നിയന്ത്രണങ്ങൾ വേർതിരിച്ചെടുക്കലിൽ ഉൾപ്പെട്ടിരുന്നു.
2 പിസിആർ റീജന്റ് തയ്യാറാക്കൽ (റിയാജന്റ് തയ്യാറാക്കൽ ഏരിയ)
2.1 കിറ്റിൽ നിന്ന് എല്ലാ ഘടകങ്ങളും നീക്കം ചെയ്ത് മുറിയിലെ താപനിലയിൽ ഉരുക്കി ഇളക്കുക. ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് കുറച്ച് സെക്കൻഡ് നേരത്തേക്ക് 8,000 rpm-ൽ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക; ആവശ്യമായ റിയാജന്റുകളുടെ അളവ് കണക്കാക്കുക, തുടർന്ന് താഴെ കൊടുത്തിരിക്കുന്ന പട്ടികയിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ പ്രതികരണ സംവിധാനം തയ്യാറാക്കപ്പെടും:
| ഘടകങ്ങൾ | N സെർവിംഗ് (25µl സിസ്റ്റം) |
| nCOV പ്രൈമർ TaqMan പ്രോബ്മിക്സ്ചർ | 18 μl × N |
| ആർടി-പിസിആർ പ്രതികരണ പരിഹാരം | 2 µl × N |
| *N = പരിശോധിച്ച സാമ്പിളുകളുടെ എണ്ണം + 1 (നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ) + 1 (nCOV)പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണം) | |
2.2 ഘടകങ്ങൾ നന്നായി കലക്കിയ ശേഷം, ട്യൂബ് ഭിത്തിയിലെ എല്ലാ ദ്രാവകവും ട്യൂബിന്റെ അടിയിലേക്ക് വീഴാൻ അനുവദിക്കുന്നതിന് കുറച്ച് സമയത്തേക്ക് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക, തുടർന്ന് 20 µl ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സിസ്റ്റം PCR ട്യൂബിലേക്ക് അലൈക്ക് ചെയ്യുക.
3 സാമ്പിളിംഗ് (മാതൃക തയ്യാറാക്കൽ സ്ഥലം)
വേർതിരിച്ചെടുത്ത ശേഷം നെഗറ്റീവ്, പോസിറ്റീവ് കൺട്രോളുകളുടെ 5μl ചേർക്കുക. പരിശോധിക്കേണ്ട സാമ്പിളിന്റെ ആർ‌എൻ‌എ പിസിആർ റിയാക്ഷൻ ട്യൂബിലേക്ക് ചേർക്കുന്നു.
ട്യൂബ് മുറുകെ അടച്ച് 8,000 rpm-ൽ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്ത് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഡിറ്റക്ഷൻ ഏരിയയിലേക്ക് മാറ്റുന്നതിന് മുമ്പ് കുറച്ച് സെക്കൻഡ് നേരം വയ്ക്കുക.
4 PCR ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ (ആംപ്ലിഫൈഡ് ഡിറ്റക്ഷൻ ഏരിയ)
4.1 ഉപകരണത്തിന്റെ സാമ്പിൾ സെല്ലിൽ റിയാക്ഷൻ ട്യൂബ് സ്ഥാപിക്കുക, തുടർന്ന് പാരാമീറ്ററുകൾ ഇനിപ്പറയുന്ന രീതിയിൽ സജ്ജമാക്കുക:
| സ്റ്റേജ് | സൈക്കിൾ നമ്പർ | താപനില(°C) | സമയം | ശേഖരംസൈറ്റ് |
| വിപരീതംട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ | 1 | 42 | 10 മിനിറ്റ് | - |
| പ്രീ-ഡീനാച്ചുറേഷ്യോn | 1 | 95 | 1 മിനിറ്റ് | - |
| സൈക്കിൾ | 45 | 95 | 15സെ. | - |
| 60 | 30-കൾ | ഡാറ്റ ശേഖരണം |
ഇൻസ്ട്രുമെന്റ് ഡിറ്റക്ഷൻ ചാനൽ തിരഞ്ഞെടുക്കൽ: ഫ്ലൂറസെൻസ് സിഗ്നലിനായി FAM、HEX、CY5 ചാനൽ തിരഞ്ഞെടുക്കുക. റഫറൻസ് ഫ്ലൂറസെന്റ് NONE ന്, ദയവായി ROX തിരഞ്ഞെടുക്കരുത്.
5 ഫല വിശകലനം (ക്രമീകരണത്തിനായി ഓരോ ഉപകരണത്തിന്റെയും പരീക്ഷണ നിർദ്ദേശങ്ങൾ പരിശോധിക്കുക)
പ്രതികരണത്തിന് ശേഷം, ഫലങ്ങൾ സംരക്ഷിക്കുക. വിശകലനത്തിന് ശേഷം, ലോഗരിഥമിക് ഗ്രാഫിൽ ഇമേജ് അനുസരിച്ച് അടിസ്ഥാന മൂല്യത്തിന്റെ ആരംഭ മൂല്യം, അവസാന മൂല്യം, പരിധി മൂല്യം എന്നിവ ക്രമീകരിക്കുക (ഉപയോക്താവിന് യഥാർത്ഥ സാഹചര്യം അനുസരിച്ച് ക്രമീകരിക്കാൻ കഴിയും, ആരംഭ മൂല്യം 3~15 ആയി സജ്ജീകരിക്കാം, അവസാന മൂല്യം 5~20 ആയി സജ്ജീകരിക്കാം, ക്രമീകരണം) വിൻഡോയുടെ പരിധിയിൽ, പരിധി രേഖ ലോഗരിഥമിക് ഘട്ടത്തിലാണ്, നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണത്തിന്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഒരു നേർരേഖയോ പരിധി രേഖയ്ക്ക് താഴെയോ ആണ്).
6 ക്വാട്ടി നിയന്ത്രണം (പരിശോധനയിൽ ഒരു നടപടിക്രമ നിയന്ത്രണം ഉൾപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്) നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണം: FAM, HEX, CY5 ഡിറ്റക്ഷൻ ചാനലുകൾക്ക് വ്യക്തമായ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഇല്ല.
COV പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണം: FAM, HEX ഡിറ്റക്ഷൻ ചാനലുകളുടെ വ്യക്തമായ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ്, Ct മൂല്യം≤32, എന്നാൽ CY5 ചാനലിന്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഇല്ല;
മുകളിൽ പറഞ്ഞ ആവശ്യകതകൾ ഒരേ പരീക്ഷണത്തിൽ ഒരേസമയം പാലിക്കണം; അല്ലാത്തപക്ഷം, പരീക്ഷണം അസാധുവാകുകയും ആവർത്തിക്കുകയും വേണം.
7 ഫലങ്ങളുടെ നിർണ്ണയം.
7.1 ടെസ്റ്റ് സാമ്പിളിലെ FAM, HEX ചാനലുകളിൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് അല്ലെങ്കിൽ Ct മൂല്യം> 40 ഇല്ലെങ്കിൽ, CY5 ചാനലിൽ ഒരു ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഉണ്ടെങ്കിൽ, സാമ്പിളിൽ 2019 ലെ പുതിയ കൊറോണ വൈറസ് (2019-nCoV) RNA ഇല്ലെന്ന് നിർണ്ണയിക്കാനാകും;
.2 FAM, HEX ചാനലുകളിൽ ടെസ്റ്റ് സാമ്പിളിൽ വ്യക്തമായ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവുകൾ ഉണ്ടെങ്കിൽ, Ct മൂല്യം ≤40 ആണെങ്കിൽ, 2019 ലെ പുതിയ കൊറോണ വൈറസിന് (2019-nCoV) സാമ്പിൾ പോസിറ്റീവ് ആണെന്ന് വിലയിരുത്താം.
7.3 FAM അല്ലെങ്കിൽ HEX ന്റെ ഒരു ചാനലിൽ മാത്രമേ ടെസ്റ്റ് സാമ്പിളിന് വ്യക്തമായ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഉള്ളൂവെങ്കിൽ, Ct മൂല്യം ≤40 ആണെങ്കിൽ, മറ്റ് ചാനലിൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഇല്ലെങ്കിൽ, ഫലങ്ങൾ വീണ്ടും പരിശോധിക്കേണ്ടതുണ്ട്. പുനഃപരിശോധനാ ഫലങ്ങൾ സ്ഥിരതയുള്ളതാണെങ്കിൽ, പുതിയതിന് സാമ്പിൾ പോസിറ്റീവ് ആണെന്ന് വിലയിരുത്താം.
കൊറോണ വൈറസ് 2019 (2019-nCoV). പുനഃപരിശോധനാ ഫലം നെഗറ്റീവ് ആണെങ്കിൽ, 2019 ലെ പുതിയ കൊറോണ വൈറസിന് (2019-nCoV) സാമ്പിൾ നെഗറ്റീവ് ആണെന്ന് വിലയിരുത്താം.
പോസിറ്റീവ് ജഡ്ജ്മെന്റ് മൂല്യം
കിറ്റിന്റെ റഫറൻസ് CT മൂല്യം നിർണ്ണയിക്കാൻ ROC കർവ് രീതി ഉപയോഗിക്കുന്നു, ആന്തരിക നിയന്ത്രണ റഫറൻസ് മൂല്യം 40 ആണ്.
പരിശോധനാ ഫലങ്ങളുടെ വ്യാഖ്യാനം
1. ഓരോ പരീക്ഷണവും നെഗറ്റീവ്, പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണങ്ങൾക്കായി പരീക്ഷിക്കണം. നിയന്ത്രണങ്ങൾ ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണ ആവശ്യകതകൾ നിറവേറ്റുമ്പോൾ മാത്രമേ പരിശോധനാ ഫലങ്ങൾ നിർണ്ണയിക്കാൻ കഴിയൂ.
2.FAM, HEX ഡിറ്റക്ഷൻ ചാനലുകൾ പോസിറ്റീവ് ആകുമ്പോൾ, സിസ്റ്റം മത്സരം കാരണം CY5 ചാനലിൽ നിന്നുള്ള (ആന്തരിക നിയന്ത്രണ ചാനൽ) ഫലം നെഗറ്റീവ് ആയിരിക്കാം.
3. ആന്തരിക നിയന്ത്രണ ഫലം നെഗറ്റീവ് ആകുമ്പോൾ, ടെസ്റ്റ് ട്യൂബിന്റെ FAM, HEX ഡിറ്റക്ഷൻ ചാനലുകളും നെഗറ്റീവ് ആണെങ്കിൽ, സിസ്റ്റം പ്രവർത്തനരഹിതമാണെന്നോ പ്രവർത്തനം തെറ്റാണെന്നോ, പരിശോധന അസാധുവാണെന്നോ അർത്ഥമാക്കുന്നു. അതിനാൽ, സാമ്പിളുകൾ വീണ്ടും പരിശോധിക്കേണ്ടതുണ്ട്.
