ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ
2019-nCoV-നുള്ള Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR ഡിറ്റക്ഷൻ കിറ്റ്
പ്രതീക്ഷിക്കുന്ന ഉപയോഗം
പുതിയ കൊറോണ വൈറസിൻ്റെ (2019-nCoV) തൊണ്ടയിലെ സ്വാബ്സ്, നാസോഫറിംഗൽ സ്വാബ്സ്, ബ്രോങ്കോഅൽവിയോളാർ ലാവേജ് ഫ്ലൂയിഡ്, സ്‌പ്യൂട്ടം എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് ഈ കിറ്റ് ഉപയോഗിക്കുന്നു. ഈ ഉൽപ്പന്നത്തിൻ്റെ കണ്ടെത്തൽ ഫലം ക്ലിനിക്കൽ റഫറൻസിനായി മാത്രമുള്ളതാണ്, മാത്രമല്ല ഇത് മാത്രം ഉപയോഗിക്കാൻ പാടില്ല. ക്ലിനിക്കൽ രോഗനിർണയത്തിനും ചികിത്സയ്ക്കുമുള്ള തെളിവുകൾ. രോഗിയുടെ ക്ലിനിക്കൽ പ്രകടനങ്ങളും മറ്റ് ലബോറട്ടറി പരിശോധനകളും സംയോജിപ്പിച്ച് അവസ്ഥയുടെ സമഗ്രമായ വിശകലനം ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
പരിശോധന തത്വം
വൺ-സ്റ്റെപ്പ് RT- PCR സാങ്കേതികവിദ്യയെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ് കിറ്റ്.വാസ്തവത്തിൽ, 2019 ലെ പുതിയ കൊറോണ വൈറസ് (2019-nCoV) ORF1ab, N ജീനുകൾ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ടാർഗെറ്റ് മേഖലകളായി തിരഞ്ഞെടുത്തു.പ്രത്യേക പ്രൈമറുകളും ഫ്ലൂറസെൻ്റ് പ്രോബുകളും (N ജീൻ പ്രോബുകൾ FAM എന്ന് ലേബൽ ചെയ്‌തിരിക്കുന്നു, ORF1ab പ്രോബുകൾ HEX എന്ന് ലേബൽ ചെയ്‌തിരിക്കുന്നു) സാമ്പിളുകളിൽ 2019-ലെ പുതിയ തരം കൊറോണ വൈറസ് RNA കണ്ടെത്തുന്നതിന് രൂപകൽപ്പന ചെയ്‌തിരിക്കുന്നു.സാമ്പിൾ ശേഖരണം, ആർഎൻഎ, പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ എന്നിവയുടെ പ്രക്രിയ നിരീക്ഷിക്കുന്നതിന് എൻഡോജെനസ് ഇൻ്റേണൽ കൺട്രോൾ ഡിറ്റക്ഷൻ സിസ്റ്റവും (സിവൈ 5 എന്ന് ലേബൽ ചെയ്‌തിരിക്കുന്ന ആന്തരിക നിയന്ത്രണ ജീൻ പ്രോബ്) കിറ്റിൽ ഉൾപ്പെടുന്നു, അതുവഴി തെറ്റായ നെഗറ്റീവ് ഫലങ്ങൾ കുറയ്ക്കുന്നു.
പ്രധാന ഘടകങ്ങൾ
| ഘടകങ്ങൾ | വ്യാപ്തം(48T/കിറ്റ്) |
| RT-PCR പ്രതികരണ പരിഹാരം | 96µl |
| nCOV പ്രൈമർ TaqMan പ്രോബ്മിക്സ്ചർ (ORF1ab, N ജീൻ, RnaseP ജീൻ) | 864µl |
| നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണം | 1500µl |
| nCOV പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ (l ORF1ab N ജീൻ) | 1500µl |
സ്വന്തം റിയാഗൻ്റുകൾ: ആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ അല്ലെങ്കിൽ ശുദ്ധീകരണ റിയാഗൻ്റുകൾ.നെഗറ്റീവ്/പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണം: പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ ടാർഗെറ്റ് ശകലം അടങ്ങിയ ആർഎൻഎയാണ്, അതേസമയം നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണം ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ്-ഫ്രീ ജലമാണ്.ഉപയോഗ സമയത്ത്, അവർ വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നതിൽ പങ്കെടുക്കുകയും പകർച്ചവ്യാധിയായി കണക്കാക്കുകയും വേണം.പ്രസക്തമായ ചട്ടങ്ങൾക്കനുസൃതമായി അവ കൈകാര്യം ചെയ്യുകയും നീക്കം ചെയ്യുകയും വേണം.
മനുഷ്യൻ്റെ RnaseP ജീൻ ആണ് ആന്തരിക റഫറൻസ് ജീൻ.
സംഭരണ വ്യവസ്ഥകളും കാലഹരണ തീയതിയും
-20±5℃, 6 മാസത്തേക്ക് സാധുതയുള്ള, 5 തവണയിൽ കൂടുതൽ ഫ്രീസുചെയ്യുന്നതും ഉരുകുന്നതും ഒഴിവാക്കുക.
ബാധകമായ ഉപകരണം
FAM / HEX / CY5 കൂടാതെ മറ്റ് മൾട്ടി-ചാനൽ ഫ്ലൂറസെൻ്റ് PCR ഉപകരണവും.
മാതൃക ആവശ്യകതകൾ
1. ബാധകമായ സ്പെസിമെൻ തരങ്ങൾ: തൊണ്ടയിലെ സ്വാബ്സ്, നാസോഫറിംഗൽ സ്വാബ്സ്, ബ്രോങ്കോൽവിയോളാർ ലാവേജ് ഫ്ലൂയിഡ്, കഫം.
2.മാതൃക ശേഖരണം (അസെപ്റ്റിക് ടെക്നിക്)
തൊണ്ടയിലെ സ്വാബ്: ഒരേ സമയം രണ്ട് സ്രവങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച് ടോൺസിലുകളും പിൻഭാഗത്തെ തൊണ്ടയിലെ ഭിത്തിയും തുടയ്ക്കുക, തുടർന്ന് സാംപ്ലിംഗ് ലായനി അടങ്ങിയ ഒരു ടെസ്റ്റ് ട്യൂബിൽ സ്വാബ് തല മുക്കുക.
കഫം: രോഗിക്ക് ആഴത്തിലുള്ള ചുമ ഉണ്ടായ ശേഷം, സാമ്പിൾ ലായനി അടങ്ങിയ ഒരു സ്ക്രൂ ക്യാപ് ടെസ്റ്റ് ട്യൂബിൽ ചുമയുടെ കഫം ശേഖരിക്കുക;ബ്രോങ്കോൽവിയോളാർ ലാവേജ് ഫ്ലൂയിഡ്: മെഡിക്കൽ പ്രൊഫഷണലുകളുടെ സാമ്പിൾ.3.സാമ്പിളുകളുടെ സംഭരണവും ഗതാഗതവും
വൈറസ് ഐസൊലേഷനും ആർഎൻഎ പരിശോധനയ്ക്കുമുള്ള മാതൃകകൾ എത്രയും വേഗം പരിശോധിക്കണം.24 മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ കണ്ടെത്താനാകുന്ന മാതൃകകൾ 4 ഡിഗ്രിയിൽ സൂക്ഷിക്കാം;24-നകം കണ്ടെത്താൻ കഴിയാത്തവ
മണിക്കൂർ -70℃ അല്ലെങ്കിൽ താഴെ സൂക്ഷിക്കണം (-70℃ സ്റ്റോറേജ് അവസ്ഥ ഇല്ലെങ്കിൽ, അവ ആയിരിക്കണം
-20℃ ഫ്രിഡ്ജിൽ താൽക്കാലികമായി സൂക്ഷിക്കുന്നു).ഗതാഗത സമയത്ത് മാതൃകകൾ ആവർത്തിച്ച് മരവിപ്പിക്കലും ഉരുകലും ഒഴിവാക്കണം.ശേഖരിച്ച ശേഷം എത്രയും വേഗം സാമ്പിളുകൾ ലബോറട്ടറിയിലേക്ക് അയയ്ക്കണം.സാമ്പിളുകൾ വളരെ ദൂരത്തേക്ക് കൊണ്ടുപോകേണ്ടതുണ്ടെങ്കിൽ, ഡ്രൈ ഐസ് സംഭരണം ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
ടെസ്റ്റ് രീതികൾ
1 സാമ്പിൾ പ്രോസസ്സിംഗും ആർഎൻഎ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ (സാമ്പിൾ പ്രോസസ്സിംഗ് ഏരിയ)
RNA വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ 200μl ദ്രാവക സാമ്പിൾ എടുക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.ബന്ധപ്പെട്ട വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ ഘട്ടങ്ങൾക്കായി, വാണിജ്യ ആർഎൻഎ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ കിറ്റുകളുടെ നിർദ്ദേശങ്ങൾ കാണുക.നെഗറ്റീവും നെഗറ്റീവും
ഈ കിറ്റിലെ നിയന്ത്രണങ്ങൾ വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നതിൽ ഉൾപ്പെട്ടിരുന്നു.
2 PCR റിയാജൻ്റ് തയ്യാറാക്കൽ (റിയാജൻ്റ് തയ്യാറാക്കൽ ഏരിയ)
2.1 കിറ്റിൽ നിന്ന് എല്ലാ ഘടകങ്ങളും നീക്കം ചെയ്ത് ഊഷ്മാവിൽ ഇളക്കുക.ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് കുറച്ച് സെക്കൻഡ് നേരത്തേക്ക് 8,000 ആർപിഎമ്മിൽ സെൻട്രിഫ്യൂജ്;ആവശ്യമായ റിയാക്ടറുകളുടെ അളവ് കണക്കാക്കുക, ഇനിപ്പറയുന്ന പട്ടികയിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ പ്രതികരണ സംവിധാനം തയ്യാറാക്കുന്നു:
| ഘടകങ്ങൾ | N സെർവിംഗ് (25µl സിസ്റ്റം) |
| nCOV പ്രൈമർ TaqMan പ്രോബ്മിക്സ്ചർ | 18 µl × N |
| RT-PCR പ്രതികരണ പരിഹാരം | 2 µl × N |
| *N = പരിശോധിച്ച സാമ്പിളുകളുടെ എണ്ണം + 1 (നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ) + 1 (nCOVപോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണം) | |
2.2 ഘടകങ്ങൾ നന്നായി മിക്സ് ചെയ്ത ശേഷം, ട്യൂബ് ഭിത്തിയിലെ എല്ലാ ദ്രാവകങ്ങളും ട്യൂബിൻ്റെ അടിയിലേക്ക് വീഴാൻ അനുവദിക്കുന്നതിന് കുറച്ച് സമയത്തേക്ക് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക, തുടർന്ന് 20 µl ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സിസ്റ്റം പിസിആർ ട്യൂബിലേക്ക് മാറ്റുക.
3 സാമ്പിളിംഗ് (മാതൃക തയ്യാറാക്കുന്ന സ്ഥലം)
വേർതിരിച്ചെടുത്തതിന് ശേഷം നെഗറ്റീവ്, പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണങ്ങളുടെ 5μl ചേർക്കുക.പരിശോധിക്കേണ്ട സാമ്പിളിൻ്റെ ആർഎൻഎ പിസിആർ റിയാക്ഷൻ ട്യൂബിലേക്ക് ചേർക്കുന്നു.
ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഡിറ്റക്ഷൻ ഏരിയയിലേക്ക് മാറ്റുന്നതിന് മുമ്പ് ട്യൂബ് മുറുകെ പിടിച്ച് 8,000 ആർപിഎമ്മിൽ സെൻട്രിഫ്യൂജ് കുറച്ച് സെക്കൻഡ് നേരം വയ്ക്കുക.
4 PCR ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ (ആംപ്ലിഫൈഡ് ഡിറ്റക്ഷൻ ഏരിയ)
4.1 ഉപകരണത്തിൻ്റെ സാമ്പിൾ സെല്ലിൽ പ്രതികരണ ട്യൂബ് സ്ഥാപിക്കുക, ഇനിപ്പറയുന്ന രീതിയിൽ പാരാമീറ്ററുകൾ സജ്ജമാക്കുക:
| സ്റ്റേജ് | സൈക്കിൾ നമ്പർ | താപനില(°C) | സമയം | സമാഹാരംസൈറ്റ് |
| വിപരീതംട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ | 1 | 42 | 10മിനിറ്റ് | - |
| പ്രീ-ഡെനാറ്ററേറ്റോn | 1 | 95 | 1മിനിറ്റ് | - |
| സൈക്കിൾ | 45 | 95 | 15സെ | - |
| 60 | 30 സെ | ഡാറ്റ ശേഖരണം |
ഇൻസ്ട്രുമെൻ്റ് ഡിറ്റക്ഷൻ ചാനൽ തിരഞ്ഞെടുക്കൽ: ഫ്ലൂറസെൻസ് സിഗ്നലിനായി FAM,HEX,CY5 ചാനൽ തിരഞ്ഞെടുക്കുക.റഫറൻസ് ഫ്ലൂറസെൻ്റ് NONE-നായി, ദയവായി ROX തിരഞ്ഞെടുക്കരുത്.
5 ഫല വിശകലനം (ക്രമീകരണത്തിനായി ഓരോ ഉപകരണത്തിൻ്റെയും പരീക്ഷണ നിർദ്ദേശങ്ങൾ പരിശോധിക്കുക)
പ്രതികരണത്തിന് ശേഷം, ഫലങ്ങൾ സംരക്ഷിക്കുക.വിശകലനത്തിന് ശേഷം, ഇമേജ് അനുസരിച്ച് അടിസ്ഥാന മൂല്യത്തിൻ്റെ ആരംഭ മൂല്യം, അവസാന മൂല്യം, ത്രെഷോൾഡ് മൂല്യം എന്നിവ ക്രമീകരിക്കുക (യഥാർത്ഥ സാഹചര്യം അനുസരിച്ച് ഉപയോക്താവിന് ക്രമീകരിക്കാൻ കഴിയും, ആരംഭ മൂല്യം 3~15 ആയി സജ്ജീകരിക്കാം, അവസാന മൂല്യം ഇങ്ങനെ ക്രമീകരിക്കാം 5 ~ 20, ക്രമീകരണം) ലോഗരിഥമിക് ഗ്രാഫിൽ വിൻഡോയുടെ ഉമ്മരപ്പടിയിൽ, ത്രെഷോൾഡ് ലൈൻ ലോഗരിഥമിക് ഘട്ടത്തിലാണ്, കൂടാതെ നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണത്തിൻ്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ വക്രം ഒരു നേർരേഖയോ പരിധിക്ക് താഴെയോ ആണ്).
6 ക്വാട്ടി കൺട്രോൾ (ഒരു നടപടിക്രമ നിയന്ത്രണം ടെസ്റ്റിൽ ഉൾപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്) നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണം: FAM, HEX, CY5 ഡിറ്റക്ഷൻ ചാനലുകൾക്ക് വ്യക്തമായ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഇല്ല
COV പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണം: FAM, HEX ഡിറ്റക്ഷൻ ചാനലുകളുടെ വ്യക്തമായ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ്, Ct മൂല്യം≤32, എന്നാൽ CY5 ചാനലിൻ്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഇല്ല;
മേൽപ്പറഞ്ഞ ആവശ്യകതകൾ ഒരേ പരീക്ഷണത്തിൽ ഒരേസമയം പാലിക്കേണ്ടതാണ്;അല്ലെങ്കിൽ, പരീക്ഷണം അസാധുവാണ്, അത് ആവർത്തിക്കേണ്ടതുണ്ട്.
7 ഫലങ്ങളുടെ നിർണ്ണയം.
7.1 ടെസ്റ്റ് സാമ്പിളിൻ്റെ FAM, HEX ചാനലുകളിൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് അല്ലെങ്കിൽ Ct മൂല്യം> 40 ഇല്ലെങ്കിൽ, CY5 ചാനലിൽ ഒരു ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഉണ്ടെങ്കിൽ, 2019 പുതിയ കൊറോണ വൈറസ് (2019-nCoV) ഇല്ലെന്ന് വിലയിരുത്താം. സാമ്പിളിലെ ആർഎൻഎ;
.2 ടെസ്റ്റ് സാമ്പിളിന് FAM, HEX ചാനലുകളിൽ വ്യക്തമായ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവുകൾ ഉണ്ടെങ്കിൽ, Ct മൂല്യം ≤40 ആണെങ്കിൽ, സാമ്പിൾ 2019 ലെ പുതിയ കൊറോണ വൈറസിന് (2019-nCoV) പോസിറ്റീവ് ആണെന്ന് വിലയിരുത്താം.
7.3 FAM-ൻ്റെയോ HEX-ൻ്റെയോ ഒരു ചാനലിൽ മാത്രമേ ടെസ്റ്റ് സാമ്പിളിന് വ്യക്തമായ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഉണ്ടെങ്കിൽ, Ct മൂല്യം ≤40 ആണെങ്കിൽ, മറ്റൊരു ചാനലിൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഇല്ലെങ്കിൽ, ഫലങ്ങൾ വീണ്ടും പരിശോധിക്കേണ്ടതുണ്ട്.പുനഃപരിശോധനാ ഫലങ്ങൾ സ്ഥിരതയുള്ളതാണെങ്കിൽ, സാമ്പിൾ പുതിയതിന് പോസിറ്റീവ് ആണെന്ന് വിലയിരുത്താം
കൊറോണ വൈറസ് 2019 (2019-nCoV).പുനഃപരിശോധനാ ഫലം നെഗറ്റീവ് ആണെങ്കിൽ, 2019-ലെ പുതിയ കൊറോണ വൈറസിന് (2019-nCoV) സാമ്പിൾ നെഗറ്റീവ് ആണെന്ന് വിലയിരുത്താം.
പോസിറ്റീവ് വിധി മൂല്യം
കിറ്റിൻ്റെ റഫറൻസ് CT മൂല്യം നിർണ്ണയിക്കാൻ ROC കർവ് രീതി ഉപയോഗിക്കുന്നു, ആന്തരിക നിയന്ത്രണ റഫറൻസ് മൂല്യം 40 ആണ്.
പരിശോധന ഫലങ്ങളുടെ വ്യാഖ്യാനം
1.ഓരോ പരീക്ഷണവും നെഗറ്റീവ്, പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണങ്ങൾക്കായി പരീക്ഷിക്കണം.നിയന്ത്രണങ്ങൾ ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണ ആവശ്യകതകൾ നിറവേറ്റുമ്പോൾ മാത്രമേ പരിശോധനാ ഫലങ്ങൾ നിർണ്ണയിക്കാൻ കഴിയൂ
2.FAM, HEX ഡിറ്റക്ഷൻ ചാനലുകൾ പോസിറ്റീവ് ആയിരിക്കുമ്പോൾ, സിസ്റ്റം മത്സരം കാരണം CY5 ചാനലിൽ നിന്നുള്ള ഫലം (ആന്തരിക നിയന്ത്രണ ചാനൽ) നെഗറ്റീവ് ആയിരിക്കാം.
3.ആന്തരിക നിയന്ത്രണ ഫലം നെഗറ്റീവ് ആയിരിക്കുമ്പോൾ, tthe ടെസ്റ്റ് ട്യൂബിൻ്റെ FAM, HEX ഡിറ്റക്ഷൻ ചാനലുകളും നെഗറ്റീവ് ആണെങ്കിൽ, സിസ്റ്റം പ്രവർത്തനരഹിതമായിരിക്കുന്നു അല്ലെങ്കിൽ പ്രവർത്തനം തെറ്റാണ്, ടെസ്റ്റ് അസാധുവാണ്.അതിനാൽ, സാമ്പിളുകൾ വീണ്ടും പരിശോധിക്കേണ്ടതുണ്ട്.
